膠體金（colloidal gold），又稱金溶膠（gold solution），是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色，因?yàn)槠鋯钨|(zhì)粒徑非常小可以分散于溶液中形成膠體，故名膠體金。膠體金可以作為標(biāo)記物用于免疫組織化學(xué)，近10多年來膠體金標(biāo)記已經(jīng)發(fā)展為一項(xiàng)重要的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫(yī)學(xué)等許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)得到發(fā)展，并越來越受到相關(guān)研究領(lǐng)域的重視。

膠體金作為標(biāo)記物用于免疫組織化學(xué)始于1971年,Faulk等應(yīng)用電鏡免疫膠體金染色法(IGS)觀察沙門氏菌，此后他們把膠體金與多種蛋白質(zhì)結(jié)合.1974年Romano等將膠體金標(biāo)記在第二抗體（馬抗人IgG）上，建立了間接免疫膠體金染色法。1978年geoghega發(fā)現(xiàn)了膠體金標(biāo)記物在光鏡水平的應(yīng)用。膠體金在免疫化學(xué)中的這種應(yīng)用，又被稱為免疫金。之后，許多學(xué)者進(jìn)一步證實(shí)膠體金能穩(wěn)定又迅速地吸附蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)的生物活性無明顯改變．它可以作為探針進(jìn)行細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)多糖、多肽、激素、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的精確定位,也可以用于日常的免疫診斷，進(jìn)行免疫組織化學(xué)定位。

那么怎樣制備膠體金？

膠體金的常規(guī)制備方法是用還原劑還原氯金酸（HAuCl4，橘黃色晶體，易潮解）里的金元素形成金膠體顆粒。這種膠體顆粒在堿性環(huán)境下帶上負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)牢固結(jié)合，對(duì)蛋白進(jìn)行標(biāo)記，用于后續(xù)的檢測，如制成膠體金試紙條（卡）進(jìn)行物質(zhì)的檢測。常用還原劑有檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等，根據(jù)還原劑類型以及還原作用的強(qiáng)弱，可以制備0.8nm～150nm不等的膠體金，通常我們選擇檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7·2H2O）。當(dāng)用1%檸檬酸三鈉還原100 mL 0.01%金氯酸時(shí)，不同體積比可以得到不同粒徑和顏色的膠體金哦。

金溶膠顆粒的直徑和制備時(shí)加入的檸檬酸三鈉量是密切相關(guān)的，保持其他條件恒定，僅改變加入的檸檬酸三鈉量，可制得不同顏色的金溶膠，也就是不同粒徑的金溶膠。
100 ml 氯金酸中檸檬酸三鈉的加入量對(duì)金溶膠粒徑的影響

１％檸檬酸三鈉（ml） 0.30   0.45   0.70   1.00   1.50   2.00

金溶膠顏色           藍(lán)灰  紫灰   紫紅   紅     橙紅   橙

吸收峰(nm)           220     240     535   525    522    518

徑粒(nm)             147     97.5    71.5    41    24.5    15

制備膠體金步驟簡單，很多文獻(xiàn)可以查到，重點(diǎn)是制備過程所用到的材料都必須是徹底清潔的。例如水至少是雙蒸水，玻璃棒、玻璃容器等要酸洗后沖洗干凈并且最好是硅化的，制備好的膠體金可以加入0.02％ NaN3在潔凈玻璃容器內(nèi)長期存放。

接下來談?wù)効蓯鄣臋z測卡：

由膠體金標(biāo)記技術(shù)發(fā)展起來的膠體金免疫快速診斷技術(shù)主要有兩種：快速斑點(diǎn)免疫金滲濾法和膠體金免疫層析法。后者，也就是膠體金檢測卡，具有操作簡便（浸入液體中就行）、快速（全程5~10分鐘搞定）、無需儀器設(shè)備（結(jié)果目測就OK）、試劑穩(wěn)定、成品易于保存（保質(zhì)期1~2年）等優(yōu)點(diǎn)，是科學(xué)研究和臨床診斷的有力工具。適合于膠體金試紙條（卡）的膠體金粒徑在20~40 nm之間為宜，制備的膠體金溶液呈紅色，膠體金被置于試紙條（卡）的樣品墊下游。當(dāng)液體樣品滴加后，液體溶解膠體金并帶動(dòng)其與樣品中的抗原（抗體），在硝酸纖維素膜的毛細(xì)作用下從一端慢慢滲移到吸收墊一端，利用抗體/抗原特異性結(jié)合及膠休金的顯色（紅色）反應(yīng)，可以檢測抗原／抗體存在與否。

膠體金試紙條（卡）主要分為雙抗夾心法和競爭法兩類，前者適合檢測大分子物質(zhì)，后者適合檢測小分子物質(zhì)。雙抗夾心法又分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法，雙抗體夾心法用來檢測抗原，雙抗原夾心法可以用來檢測抗體。除了雙抗原夾心法以外，間接法也用于抗體的檢測，這與ELISA（酶聯(lián)免疫法）有相似之處。